Detection of Resistance Mutations in Chronic Hepatitis B Patients Receiving Lamivudine Therapy Using Molecular Method

Kırdar, Sevin; Yaşa, Mehmet Hadi; Aydın, Neriman; Gültekin Korkmazgil, Berna

Sevin Kırdar¹, Mehmet Hadi Yaşa², Neriman Aydın¹, Berna Gültekin Korkmazgil¹

¹Department of Medical Microbiology, Adnan Menderes University, Aydin, Turkey
²Department of Gastroenterology, Adnan Menderes University, Aydin, Turkey

INTRODUCTION: Hepatitis B virus (HBV) infection is a global health problem and major cause of morbidity and mortality worldwide. Chronic HBV infection leads to cirrhosis, liver failure and hepatocellular carcinoma. Increased resistance to antivirals that are used to treat chronic hepatitis B was observed over the years. In this study, we aimed to determine the frequency of lamivudine (LAM) resistance seen in chronic hepatitis B patients and the mutant profiles using multiplex PCR and reverse hybridization methods.
METHODS: Between May 2007 and January 2012, the study was conducted a total of 50 subjects were followed-up for chronic hepatitis B and receiving LAM therapy for at least one year at the Adnan Menderes University Faculty of Medicine, Department of Internal Medicine, Gastroenterology Unit were included. Markers of HBsAg/anti-HBs, hepatitis B e antigen (HBeAg)/anti-HBe, and anti-HBc were studied using the Architect instrument Assay. The isolation of nucleic acid from serum samples performed by a commercial kit according to the manufacturer’s instruction. HBV-DNA levels were determined by commercial real-time polymerase chain reaction (PCR) method. Mutations of LAM resistance was determined by multiplex PCR and revers hibridization method.
RESULTS: Primary and compensatory mutants were detected in 12 patients (24%) who were using lamivudine one year. Six of 12 (50%) patients LAM resistance (rtM204I, YIDD motif) alone, LAM and ADV resistance in four (33.3%) patients, and LAM + ADV with compensatory mutations in two patient (16.7%) were founded.
DISCUSSION AND CONCLUSION: The most commonly detected mutations are rtM204I and rtL180 mutations. Lamivudine resistance in chronic hepatitis B patients in our locality of....... province is similar to the results of other studies in our country.

Keywords:

Lamivudin Tedavisi Alan Kronik Hepatit B Hastalarında Direnç Mutasyonlarının Moleküler Yöntem ile Belirlenmesi

Sevin Kırdar¹, Mehmet Hadi Yaşa², Neriman Aydın¹, Berna Gültekin Korkmazgil¹

¹Adnan Menderes Üniversitesi Tıp Fakültesi, Tıbbi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı, Aydın.
²Adnan Menderes Üniversitesi Tıp Fakültesi, Gastroenteroloji Bilim Dalı, Aydın.

GİRİŞ ve AMAÇ: Hepatit B virüs (HBV) enfeksiyonu önemli bir sağlık problemi olup tüm dünyada morbidite ve mortalite’nin başlıca nedenlerinden biridir. Bu virüsün neden olduğu enfeksiyonun kronikleşmesi karaciğerde fibrozis, siroz ve kansere yol açabilmektedir. Kronik hepatit B tedavisinde kullanılan antivirallere karşı gelişen dirençte yıllar içinde artış olduğu gözlenmiştir. Çalışmamızda, multipleks PCR ve ters hibridizasyon yöntemi ile lamivudin (LAM) tedavisi alan kronik Hepatit B hastalarında ilaç direnci mutasyonlarının sıklığı ve mutant suş tiplerinin belirlenmesi amaçlanmıştır.
YÖNTEM ve GEREÇLER: Çalışmaya Mayıs 2007-Ocak 2012 tarihleri arasında.................... Hastanesi Gastroenteroloji Polikliniğinde kronik hepatit B (KHB) tanısıyla izlenen ve bir yıl süre ile LAM kullanan 50 hasta alınmıştır. HBV serolojisi (HBsAg, anti-HBs, anti-HBc IgM ve total, HBeAg, AntiHBe) kemilüminesan immünolojik yöntem ile Architect otoanalizöründe çalışılmıştır. Serum örneklerinden HBV DNA izolasyonu ticari bir kit ile üretici firma önerileri doğrultusunda yapılmıştır. HBV DNA düzeyleri gerçek zamanlı PCR yöntemi ile belirlenmiştir. HBV’ünde LAM direncine neden olan mutasyonlar multipleks PCR ve ters hibridizasyon yöntemi ile araştırılmıştır.
BULGULAR: Çalışmamızda bir yıl lamivudin tedavisi kullanmış, kronik B hepatitli 50 hastanın 12’sinde (%24) primer ve onarıcı mutasyonlar belirlenmiştir. Mutasyon saptanan hastalardan altısında ( %50) LAM direnci (rtM204I, YIDD motifi) tek başına, dördünde ( %33.3) LAM ve ADV direnci birlikte ve iki hastada (%16.7) LAM ve ADV direnci birlikte kompensatuvar (onarıcı) mutasyonlar saptanmıştır.
TARTIŞMA ve SONUÇ: Çalışmamızda en sık rtM204I ve rtL180 mutasyonları belirlenmiştir........ ilinde lamivudin kullanan kronik hepatit B hastalarında, LAM direnci ülkemizde yapılan önceki çalışmalardakine benzer oranda bulunmuştur.

Anahtar Kelimeler:

Sevin Kırdar, Mehmet Hadi Yaşa, Neriman Aydın, Berna Gültekin Korkmazgil. Detection of Resistance Mutations in Chronic Hepatitis B Patients Receiving Lamivudine Therapy Using Molecular Method. . 2016; 46(3): 135-140

Corresponding Author: Sevin Kırdar, Türkiye