Wachstum von Spiralganglienneuriten in vitro unter CO2-freier Atmosphäre in Leibowitz's L-15-Medium

Das Wachstum von Spiralganglienzellen (SGZ) der Ratte in vitro in CO2-abhängigen Kulturmedien ist ein etabliertes Zellkulturverfahren. Das Wachstum der SGN in CO2-unabhängigen Kulturmedien würde einen Versuchsaufbau mit kontinuierlicher mikroskopischer Beobachtung der Zellkultur deutlich vereinfachen, da auf eine geschlossene CO2-Atmösphäre verzichtet werden kann. Zielsetzung: Vergleich des Wachstumsverhaltens von SGN in modifiziertem DMEM-Medium unter 5%-CO2-Atmosphäre und in Leibowitz's L-15-Medium unter Normalatmosphäre (0,03% CO2). Methoden: Am 4. postpartalen Tag (P4) wurden SGZ aus der Cochlea von Sprague-Dawley-Ratten explantiert und bei 37° Celsius in Kultur genommen. Als Kulturmedium wurde zum einen modifiziertes DMEM-Medium unter 5%-CO2-Atmosphäre und zum anderen ein modifiziertes L-15-Medium unter Normalatmosphäre verwendet. Jeweils die Hälfte der Kulturen wurde mit Neurotrophin-3 (NT-3) stimuliert. Das SGN-Wachstumsverhalten (Anzahl und Länge der ausgesprossten Neuriten) wurde nach 72h ausgewertet. Ergebnisse: Im DMEM-Medium steigerte die Zugabe von NT-3 zum Kulturmedium sowohl die Zahl als auch die Länge der auswachsenden SGN. Im L-15-Medium ergab die Zugabe von NT-3 zum Kulturmedium ebenfalls eine Steigerung der Anzahl und die Länge der auswachsenden SGN. Schlussfolgerungen: Die SGN zeigten unter den verglichenen Kulturbedingungen ein ähnliches Wachstumsverhalten. Bei Kultur in Leibowitz's L-15-Medium kann somit für spezielle Fragestellungen ein adäquates SGN-Wachstum ohne CO2-Atmösphäre erreicht werden.

Unterstützt durch FoRUM-Projekt AZ327/2002 der Medizinischen Fakultät der Ruhr-Universität Bochum