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DOI: 10.1055/s-2003-815208
Einfluss von Östradiol und Testosteron auf Exozytoseproteine in gonadotropen Hypophysenzellen
Zielsetzung: Langzeitbehandlung mit Östradiol stimuliert die LH-Sekretion gonadotroper Hypophysenzellen, Testosteron dagegen inhibiert sie. Unsere Vorarbeiten zeigten, dass diese Modulation der Gonadotropinsekretion teilweise durch Veränderungen des Kalziumsignals zu erklären ist. Wir fanden des Weiteren Hinweise darauf, dass Elemente der Signaltransduktion distal des Kalziumsignals involviert sein könnten. Die Interaktion verschiedener Exozytoseproteine führt unmittelbar zur Sekretion der Gonadotropine. Daher haben wir geprüft, wie die Exozytoseproteine durch Östradiol und Testosteron reguliert werden.
Material und Methoden: Klonierte gonadotrope Hypophysenzellen der Maus (αT3–1 Zellen) wurden mit Östradiol (1 nM,100 pM) und Testosteron (10 nM) für 24h bzw. 48h behandelt. Die Expression der Proteine und die Protein-Protein-Interaktionen von Vamp-2, SNAP-25, Munc-18 und Syntaxin-4 wurden mittels Immunoblot, Co-Immunopräzipitation und real-time PCR untersucht.
Ergebnisse: Die Expression der Exozytoseproteine SNAP-25 und Vamp-2 (auf Protein- und RNA-Ebene) wurde durch Östradiol und Testosteron signifikant inhibiert. Im Gegensatz dazu war die Expression von Munc-18 nach Behandlung mit Östradiol signifikant erhöht, wobei Testosteron auf RNA-Ebene die Expression des Munc-18-Proteins signifikant inhibiert. Es wurden folgende Interaktionspartner gefunden: SNAP-25/Vamp-2, Syntaxin-4/SNAP-25, Syntaxin-4/Vamp-2 und Syntaxin-4/Munc-18. Östradiol verringerte die Syntheserate des SNARE-Komplexes. Die Modulation von SNAP-25 und Vamp-2 durch Östradiol und Testosteron erfolgte nach ca. 4h, wohingegen Munc-18 schon nach nur 60min reguliert wurde.
Schlussfolgerung: Östradiol und Testosteron modulieren die Expression der Exozytoseproteine sowohl auf Protein- und RNA-Ebene. Dadurch wird ein weiterer Beitrag zur Modulation der LH Sekretion geleistet.