Evolution of subpatent parasitaemia in Trypanosoma cruzi chronically infected mice with the help of a cyclophosphamide amplification transfer assay

Alvarez, José M.; Oshima, Ayumi; Mozer, Veronica; Guimarães, Liliane; Menezes, Hércules

doi:10.1590/S0036-46651991000600013

Abstracts

We have evaluated the sensitivity of the classical blood subinoculation method, modified through cyclophosphamide treatment of transferred mice, for the detection of occult parasitaemias in Trypanosoma cruzi chronically infected mice. Besides its simplicity, the method was shown to be highly sensitive for both the "chronic" phase parasites (99% of chronic cases were shown to harbour occult parasitaemias) and for the acute phase parasites (T. cruzi could be detected in 53.8% of animals transferred with one Y strain parasite and in 20% of animals transferred with one CL strain parasite). Using acute phase bloodforms, the assay proved to be more sensitive than conventional subinoculation when dealing with the CL, but not the Y strain of the parasite. With the help of this parasite detection tool, we have studied during a one year period, the evolution of subpatent parasitaemias in a group of mice which survived through chemotherapy from lethal acute phase of T. cruzi infection. Cyclophosphamide transfer assay revealed occult parasitaemias in 100% of the chronic animals, nevertheless, continuous and discontinuous patterns of positivity were observed.

Trypanosoma cruzi; Infection in mice; Parasitaemia; Cyclophosphamide amplification transfer assay

Avaliamos o potencial do ensaio clássico de subinoculação, modificado pelo tratamento com ciclofosfamida dos animais receptores, na detecção de parasitemias ocultas em camundongos com in-fecção crônica pelo Trypanosoma cruzi. O ensaio, além de simples, mostrou ter uma alta sensibilidade; assim, utilizando-se parasitas da fase aguda, o tratamento com ciclofosfamida revelou parasitemias em 53,8% dos animais infectados com um tripanosoma da cepa y, e em 20% dos animais infectados com um tripanosoma da cepa CL. O tratamento com ciclofosfamida aumentou a sensibilidade do ensaio de subinoculação nas infecções pela cepa CL, e resultou em igual sensibilidade quando utilizada a cepa Y. Nos camundongos de fase crônica, obtidos a partir de diversos esquemas de imunoprofilaxia (BCG, soro de camundongo imune) ou quimioterapia, o ensaio revelou parasitemias ocultas em 99% dos animais. Auxiliados pelo método da subinoculação-ciclofosfamida estudamos no espaço de um ano a evolução das parasitemias ocultas em um grupo de camundongos infectados que sobreviveram à fase aguda pelo tratamento com Benzonidazol. O ensaio revelou parasitemias ocultas em 100% dos animais. Entretanto, padrões contínuos e discontinuos de positividade puderam ser detectados.

IMMUNOTHERAPY

Evolution of subpatent parasitaemia in Trypanosoma cruzi chronically infected mice with the help of a cyclophosphamide amplification transfer assay

Evolução das parasitemias subpatentes na infecção crônica experimental pelo Trypanosoma cruzi através do ensaio de subinoculação modificado pelo tratamento com ciclofosfamida

José M. Alvarez^I; Ayumi Oshima^I; Veronica Mozer^I; Liliane Guimarães^II; Hércules Menezes^III

^IDepartamento de Imunologia, Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade de São Paulo. São Paulo, SP, Brazil

^IIImmunology Research and Training Center, Instituto Butantan. São Paulo, SP, Brazil

^IIIDepartamento de Bioquímica e Microbiología, Instituto de Biociências, UNESP, Rio Claro, SP, Brazil

^{Address for correspondence} Address for correspondence: José M. Alvarez Departamento de Imunologia, Instituto de Ciências Biomédicas da Universidade de São Paulo Av. Prof. Lineu Prestes, 2415 CEP 05508 São Paulo, SP, Brazil

SUMMARY

We have evaluated the sensitivity of the classical blood subinoculation method, modified through cyclophosphamide treatment of transferred mice, for the detection of occult parasitaemias in Trypanosoma cruzi chronically infected mice. Besides its simplicity, the method was shown to be highly sensitive for both the "chronic" phase parasites (99% of chronic cases were shown to harbour occult parasitaemias) and for the acute phase parasites (T. cruzi could be detected in 53.8% of animals transferred with one Y strain parasite and in 20% of animals transferred with one CL strain parasite). Using acute phase bloodforms, the assay proved to be more sensitive than conventional subinoculation when dealing with the CL, but not the Y strain of the parasite. With the help of this parasite detection tool, we have studied during a one year period, the evolution of subpatent parasitaemias in a group of mice which survived through chemotherapy from lethal acute phase of T. cruzi infection. Cyclophosphamide transfer assay revealed occult parasitaemias in 100% of the chronic animals, nevertheless, continuous and discontinuous patterns of positivity were observed.

Key words: Trypanosoma cruzi; Infection in mice; Parasitaemia; Cyclophosphamide amplification transfer assay.

RESUMO

Avaliamos o potencial do ensaio clássico de subinoculação, modificado pelo tratamento com ciclofosfamida dos animais receptores, na detecção de parasitemias ocultas em camundongos com in-fecção crônica pelo Trypanosoma cruzi.

O ensaio, além de simples, mostrou ter uma alta sensibilidade; assim, utilizando-se parasitas da fase aguda, o tratamento com ciclofosfamida revelou parasitemias em 53,8% dos animais infectados com um tripanosoma da cepa y, e em 20% dos animais infectados com um tripanosoma da cepa CL. O tratamento com ciclofosfamida aumentou a sensibilidade do ensaio de subinoculação nas infecções pela cepa CL, e resultou em igual sensibilidade quando utilizada a cepa Y. Nos camundongos de fase crônica, obtidos a partir de diversos esquemas de imunoprofilaxia (BCG, soro de camundongo imune) ou quimioterapia, o ensaio revelou parasitemias ocultas em 99% dos animais.

Auxiliados pelo método da subinoculação-ciclofosfamida estudamos no espaço de um ano a evolução das parasitemias ocultas em um grupo de camundongos infectados que sobreviveram à fase aguda pelo tratamento com Benzonidazol. O ensaio revelou parasitemias ocultas em 100% dos animais. Entretanto, padrões contínuos e discontinuos de positividade puderam ser detectados.

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ACKNOWLEDGEMENTS

We wish to thank Dr. Ivan Mota for kindly reviewing the manuscript.

Recebido para publicação em 18/03/1991.

Aceito para publicação em 02/10/1991.

1. ANDRADE, Z.A.; ANDRADE, S.G. & SADIGURSKY, M. - Enhancement of chronic Trypanosoma cruzi myocarditis in dogs treated with low doses of cyclophosphamide. Amer. J. Path., 127: 467-473, 1987.
2. BAQUERIZO, A.L.; AVILÉS, N.F. & MÁRMOL, C.F. - Aislamiento de Trypanosoma cruzi por inoculación del suero humano en cerebro de ratón. Rev. ecuat. Hig. Med. trop., 16: 152-157, 1959.
3. BRENER, Z. - Therapeutic activity and criterion of cure on mice experimentally infected with Trypanosoma cruzi. Rev. Inst Med. trop. S. Paulo, 4: 389-396, 1962.
4. BRENER, Z. & CHIARI, E. - The effects of some immunesuppressive agents in experimental chronic Chagas's disease. Trans. roy. Soc. trop. Med. Hyg., 65: 629-636, 1971.
5. BRUMPT, E. - O Xenodiagnóstico. Aplicaçăo ao diagnóstico de algumas infecçőes parasitárias e em particular ŕ tripanosomose de Chagas. An. paul. Med. Cirurg., 3: 97-102, 1914.
6. CANÇADO, J.R. & BRENER, Z. - Terapęutica da doença de Chagas. In: BRENER, Z. & ANDRADE, Z., ed. - Trypanosoma cruzi e Doença de Chagas. Rio de Janeiro, Guanabara Koogan, 1979. p. 362-424.
7. CHIARI, E. & BRENER, Z. - Contribuiçăo ao diagnóstico parasitológico da doença de Chagas na sua fase crônica. Rev. Inst. Med. trop. S. Paulo, 8: 134-138, 1966.
8. FILARDI, L.S. & BRENER, Z. - Susceptibility and natural resistance of Trypanosoma cruzi strains to drugs used clinically in Chagas disease. Trans. roy. Soc. trop. Med. Hyg., 81: 755-759, 1987.
9. GUIMARĂES, L.; TAKEHARA, H.A. & ALVAREZ, J.M. - Protective effects of 3,6 bis (2-piperidinoethoxy) acridine trihydrochloride (CL-246738) in experimental acute Trypanosoma cruzi infection. Trans. roy. Soc. trop. Med. Hyg., 82: 579-580, 1988.
10. HUTHER, A.M. - Ultrastructural investigations on the effect of cyclophosphamide on experimental Trypanosoma cruzi infections. Tropenmed. Parasit., 32: 51-54, 1981.
11. KUMAR, R.; KLINE, I. & ABELMANN, W.H. - Immunesuppression in experimental acute and subacute chagasic myocarditis. Amer. J. trop. Med. Hyg., 19: 932-939, 1970.
12. MARTINEZ-SILVA, R.; LOPEZ, U.A.; COLON, J.I. & CHIRIBOGA, J. - Isolation of Trypanosoma cruzi from blood of acutely and chronically infected mice in tissue culture. Amer. J. trop. Med. Hyg., 18: 878-884, 1969.
13. SANABRIA, A. - Ultrastructure of Trypanosoma cruzi in mouse brain. Exp. Parasit., 23: 379-391, 1968.
14. SCHAUB, G.A. & SCHOTTELIUS, J. - Identification of trypanosomes isolated from reduviidae from North Chile. Z. Parasitenk., 70: 3-9, 1984.
15. SILVA, J.S. & ROSSI, M.A. - Intensification of acute Trypanosoma cruzi myocarditis in Balb/C mice pre-treated with low doses of cyclophosphamide or gamma irradiation. J. exp. Path., 71: 33-39, 1990.

Address for correspondence:

José M. Alvarez

Departamento de Imunologia, Instituto de Ciências Biomédicas da Universidade de São Paulo

Av. Prof. Lineu Prestes, 2415

CEP 05508 São Paulo, SP, Brazil

Publication Dates

Publication in this collection
11 Sept 2006
Date of issue
Dec 1991

History

Received
18 Mar 1991
Accepted
02 Oct 1991

This work is licensed under a Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License.

[1] 1. ANDRADE, Z.A.; ANDRADE, S.G. & SADIGURSKY, M. - Enhancement of chronic Trypanosoma cruzi myocarditis in dogs treated with low doses of cyclophosphamide. Amer. J. Path., 127: 467-473, 1987.

[2] 2. BAQUERIZO, A.L.; AVILÉS, N.F. & MÁRMOL, C.F. - Aislamiento de Trypanosoma cruzi por inoculación del suero humano en cerebro de ratón. Rev. ecuat. Hig. Med. trop., 16: 152-157, 1959.

[3] 3. BRENER, Z. - Therapeutic activity and criterion of cure on mice experimentally infected with Trypanosoma cruzi. Rev. Inst Med. trop. S. Paulo, 4: 389-396, 1962.

[4] 4. BRENER, Z. & CHIARI, E. - The effects of some immunesuppressive agents in experimental chronic Chagas's disease. Trans. roy. Soc. trop. Med. Hyg., 65: 629-636, 1971.

[5] 5. BRUMPT, E. - O Xenodiagnóstico. Aplicaçăo ao diagnóstico de algumas infecçőes parasitárias e em particular ŕ tripanosomose de Chagas. An. paul. Med. Cirurg., 3: 97-102, 1914.

[6] 6. CANÇADO, J.R. & BRENER, Z. - Terapęutica da doença de Chagas. In: BRENER, Z. & ANDRADE, Z., ed. - Trypanosoma cruzi e Doença de Chagas. Rio de Janeiro, Guanabara Koogan, 1979. p. 362-424.

[7] 7. CHIARI, E. & BRENER, Z. - Contribuiçăo ao diagnóstico parasitológico da doença de Chagas na sua fase crônica. Rev. Inst. Med. trop. S. Paulo, 8: 134-138, 1966.

[8] 8. FILARDI, L.S. & BRENER, Z. - Susceptibility and natural resistance of Trypanosoma cruzi strains to drugs used clinically in Chagas disease. Trans. roy. Soc. trop. Med. Hyg., 81: 755-759, 1987.

[9] 9. GUIMARĂES, L.; TAKEHARA, H.A. & ALVAREZ, J.M. - Protective effects of 3,6 bis (2-piperidinoethoxy) acridine trihydrochloride (CL-246738) in experimental acute Trypanosoma cruzi infection. Trans. roy. Soc. trop. Med. Hyg., 82: 579-580, 1988.

[10] 10. HUTHER, A.M. - Ultrastructural investigations on the effect of cyclophosphamide on experimental Trypanosoma cruzi infections. Tropenmed. Parasit., 32: 51-54, 1981.

[11] 11. KUMAR, R.; KLINE, I. & ABELMANN, W.H. - Immunesuppression in experimental acute and subacute chagasic myocarditis. Amer. J. trop. Med. Hyg., 19: 932-939, 1970.

[12] 12. MARTINEZ-SILVA, R.; LOPEZ, U.A.; COLON, J.I. & CHIRIBOGA, J. - Isolation of Trypanosoma cruzi from blood of acutely and chronically infected mice in tissue culture. Amer. J. trop. Med. Hyg., 18: 878-884, 1969.

[13] 13. SANABRIA, A. - Ultrastructure of Trypanosoma cruzi in mouse brain. Exp. Parasit., 23: 379-391, 1968.

[14] 14. SCHAUB, G.A. & SCHOTTELIUS, J. - Identification of trypanosomes isolated from reduviidae from North Chile. Z. Parasitenk., 70: 3-9, 1984.

[15] 15. SILVA, J.S. & ROSSI, M.A. - Intensification of acute Trypanosoma cruzi myocarditis in Balb/C mice pre-treated with low doses of cyclophosphamide or gamma irradiation. J. exp. Path., 71: 33-39, 1990.

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