研究快报 Open Access
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世界华人消化杂志. 2004-11-15; 12(11): 2747-2749
在线出版日期: 2004-11-15. doi: 10.11569/wcjd.v12.i11.2747
乌斯他丁对急性胰腺炎大鼠肝损伤的保护作用
李旭, 石力, 赵碧, 田伏洲, 黄大熔
李旭, 石力, 田伏洲, 黄大熔, 成都军区总医院全军普外中心 四川省成都市 610083
赵碧, 成都军区总医院临床实验科 四川省成都市 610083
通讯作者: 田伏洲, 610083, 四川省成都市, 成都军区总医院全军普外中心. lishi@mail.sc.cninfo.net
收稿日期: 2004-07-28
修回日期: 2004-09-13
接受日期: 2004-09-29
在线出版日期: 2004-11-15

目的: 观察乌斯他丁(ulinastatin, UTI)对急性胰腺炎大鼠肝脏核因子κB(nuclear factor kappa B, NF-κB)的抑制及其对肝损伤的损伤保护作用.

方法: Wistar大鼠72只, 随机分为: 急性胰腺炎组(AP), 急性胰腺炎UTI治疗组(APU)和假手术组(SO). 分别于术后3, 6, 12, 24 h检测肝组织中NF-κB活性、血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平.

结果: SO组术后未见NF-κB活化, 血浆ALT及肝脏病理无显著变化. 与SO组相比, AP组术后3, 6 h NF-κB活性(积分灰度)显著增加(3.13±0.57 vs 0.71±0.10, 1.92±0.26 vs 0.67±0.11, P<0.01), 血浆ALT在3-24 h也显著高于SO组(1.1±0.2 vs 0.7±0.09, 1.6±0.2 vs 0.7±0.1, 2.4±0.4 vs 0.7±0.09, 3.5±0.7 vs 0.8±0.1, P<0.01). APU组NF-κB活性在3, 6 h后显著低于AP组(2.26±0.41 vs 3.13±0.57, 1.56±0.23 vs 1.92±0.26, P<0.01), 血浆ALT较AP组在6, 12, 24 h后也有了显著下降(1.2±0.2 vs 1.6±0.2, 1.8±0.3 vs 2.4±0.4, 2.5±0.5 vs 3.5±0.7, P<0.01或P<0.05).

结论: UTI能够抑制NF-κB活化, 对急性胰腺炎大鼠肝损伤具有保护作用.

关键词: N/A

引文著录: 李旭, 石力, 赵碧, 田伏洲, 黄大熔. 乌斯他丁对急性胰腺炎大鼠肝损伤的保护作用. 世界华人消化杂志 2004; 12(11): 2747-2749
N/A
N/A
Correspondence to: N/A
Received: July 28, 2004
Revised: September 13, 2004
Accepted: September 29, 2004
Published online: November 15, 2004

N/A

Key Words: N/A


0 引言

急性胰腺炎肝损伤发生过程中, 有着许多炎性因子的参与[1-2]. 而核因子κB则是一类主要参与机体炎性分子表达调控的转录因子[3-5], 他参与了急性胰腺炎肝损伤发生过程[6]. 我们观察了大鼠急性胰腺炎发生时, 乌斯他丁(UTI)对NF-κB活化的抑制作用以及由此而产生的对肝损伤的保护作用.

1 材料和方法
1.1 材料

Wistar大鼠72只, 雌雄不限, 体质量200-250 g, 随机分为3组: (1)急性胰腺炎组(AP组, 24只): 用3 g/L戊巴比妥钠ip麻醉(10 mL/kg), 上腹部正中切口入腹, 经十二指肠穿刺胆管成功后, 以无创血管夹阻断肝门部胆管, 向胰管内逆行注入50 g/L牛磺胆酸钠(1 mL/kg), 注射完毕后松开血管夹, 关腹, 皮下注射生理盐水2 mL, 以补充术中丢失水分; (2)急性胰腺炎UTI治疗组(APU组, 24只): 诱导胰腺炎前1 h ip UTI(10万u/kg); (3)假手术组(SO组, 24只): 操作方法同1, 但不向胰管内注入牛磺胆酸钠. 各组分别在术后3, 6, 12, 24 h再次开腹, 经下腔静脉采血约5 mL, 置于肝素钠抗凝瓶中, 离心(2 000 r/min, 1 min), 取上清冻存; 并取大小约0.5 cm3肝中叶组织二块, 一块浸泡于40 g/L多聚甲醛中, 另一块置于液氮中保存.

1.2 方法

1.2.1 肝组织NF-κB活性: 参照文献介绍的方法对肝组织进行核蛋白提取, 并用考马斯亮蓝测定蛋白浓度, 调蛋白浓度为0.5 μg/L后置于-70 ℃保存. 以γ-32P在T4激酶的作用下标记NF-κB探针, 探针序列为5'-AGTGAGGGGACTTTCCCAGGC-3'. 将标记的探针同肝组织核蛋白进行结合后, 置于非变性聚丙稀酰胺凝胶中电泳并进行放射自显影, 用凝胶扫描分析仪对显影结果进行分析, 以积分灰度值表示NF-κB的活性变化.

1.2.2 血浆丙氨酸氨基转移酶: 用自动生化分析仪(Bckman CX7)进行ALT检测.

统计学处理 结果以mean±SD表示, 组间行t检验, P<0.05为差异有显著意义; P<0.01为差异有极显著意义.

2 结果
2.1 肝组织NF-κB活性

除SO组外, 其余2组在术后3 h, 肝组织中NF-κB存在显著活化, 6 h后活化程度下降, 但仍显著高于SO组(P<0.01), 术后12 h NF-κB活化程度则明显下降, 同SO组相比无显著差异(P>0.05), 至24 h活化消失. 其中AP组NF-κB活化程度在3-6 h均显著高于APU组(P<0.01, 表1).

表1 急性胰腺炎大鼠肝组织NF-κB活性的积分灰度值(mean±SD, n = 24).
分组t(术后)/h
3612
AP3.13±0.571.92±0.260.8±0.12
APU2.26±0.41b1.56±0.23b0.75±0.10
SO0.71±0.100.67±0.110.69±0.11
2.2 血浆ALT

SO组ALT术后无明显变化, AP及APU组ALT在术后3-24 h均呈持续性上升, 显著高于SO组(P<0.01). 但6 h后APU组ALT明显低于AP组(P<0.05或P<0.01, 表2).

表2 急性胰腺炎大鼠血浆ALT(mean±SD, n = 24, kat/L).
分组t(术后)/h
361224
AP1.1±0.21.6±0.22.4±0.43.5±0.7
APU1.2±0.11.2±0.2c1.8±0.3d2.5±0.5d
SO0.7±0.09 b0.7±0.1b0.7±0.09b0.8±0.1b
3 讨论

急性胰腺炎常合并全身多脏器功能损害, 而肝脏则是最常受累的器官之一, 急性胰腺炎所引起的肝损害不但可以加重胰腺炎病情, 肝功能的好坏还直接关系到其他脏器并发症的出现与否. 核因子κB是一类能与某些基因启动子及增强子区的κB序列结合的蛋白质, 他能启动或增强这些基因的转录[7-9]. 在静息的细胞中, NF-κB以无活性的形式存在于细胞质之中, 当受到一定的刺激后, NF-κB发生活化, 活化的NF-κB于是发生核易位, 同靶基因启动子或增强子上的κB结合位点, 从而启动或增强这些基因的转录[10-13]. 研究表明, NF-κB可以促进与炎症有关的多种基因的转录[14-19], 从而参与多种原因引起的组织损伤过程[20-25], 在急性胰腺炎发生过程中, 肝组织中NF-κB发生了显著活化, 活化的NF-κB参与了肝损伤的发生[6].

乌斯他丁是一种从人的尿液中提取出来的蛋白多肽, 他具有抑制多种酶活性、清除氧自由基、抑制炎症递质释放的作用. Itabashi et al[26]发现, 乌斯他丁能够抑制肝脏ICAM-1以及CNCI表达, 降低血浆TNF-α浓度. Aosasa et al[27]则证明乌斯他丁可以抑制LPS刺激下的单核细胞NF-κB的激活, 降低TNF-α表达. 本实验结果显示, APU组在术后3-6 h NF-κB活化程度显著低于AP组, 与此同时, 血浆ALT在术后6-24 h也显著低于AP组. 这就说明UTI对急性胰腺炎肝损伤具有保护作用, 其产生作用的机制可能与抑制NF-κB活化有关.

编辑:N/A

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