Abstract

Macrophages, which constitute the first line of defense, pour their secretions in the mileu following stimulation with pathogens. These secretory products, referred to as macrophage secretory products (MSPs), can influence ultimate outcome of an infection. In the present investigation, it was observed that different strains of Pseudomonas aeruginosa vary in their ability to stimulate macrophages leading to variability in generation of macrophage secretory products. Cytokine levels, reactive nitrogen intermediates and protein content of macrophage secretory products generated with biofilm cells of P. aeruginosa was found to be more as compared to their planktonic counterparts. The effect of macrophage secretory products produced in response to interaction of macrophages with P. aeruginosa on elaboration of virulence factors produced by planktonic and biofilm cell forms of this pathogen was assessed. Significant enhancement in growth and elaboration of all the virulence determinants by both the cell forms was observed when P. aeruginosa was grown in presence of supernatants with macrophage secretory products. Implications of these findings in relation to urinary tract infections induced by P. aeruginosa have been discussed.

Résumé

Les macrophages qui constituent la première ligne de défense contre l'infection, excrètent dans le milieu des cytokines après stimulation par les pathogènes. Ces produits de sécrétions référencés comme «macrophage secretory products (MSPs)» peuvent influence le devenir d'une infection. Dans le présent travail, il a été observé que différentes souches de Pseudomonas aeruginosa varient dans leur capacité à stimuler les macrophages permettant ainsi une variabilité dans l'excrétion des produits élaborés macrophages. La quantité de cytokines élaborée par les macrophages a été plus importante à partir de P. aeruginosa en biofilm par rapport aux formes de la même bactérie en culture.

L'effet des substances élaborées par les macrophages, sur les facteurs de virulence de P. aeruginosa a été testé selon les formes de présentation de la bactérie (biofilm ou culture). Une augmentation significative dans l'élaboration de tous les déterminants de la virulence a été observée dans les deux formes de P. aeruginosa en présence de surnageants des produits de sécrétion de macrophages. L'implication de ces constatations en relations avec les infections du tractus urinaire par P. aeruginosa a été discutée.

Keywords: Macrophage secretory products; Pseudomonas aeruginosa; Biofilm cells; Virulence factors

Mots clés: Produits de sécrétion des macrophages; Pseudomonas aeruginosa; Cellules constituant les biofilms; Facteurs de virulence

Article Outline

1. Introduction

2. Material and methods

2.1. Organisms

2.2. Generation of planktonic cells and growth profile studies

2.3. Generation of biofilms and growth profile studies

2.4. Isolation of peritoneal macrophages

2.5. Preparation of macrophage secretory products (MSPs)

2.6. Characterization of macrophage secretory products (MSPs)

2.7. Preparation of cell free supernatant (CFS)

2.8. Alginate determination

2.9. Cell surface hydrophobicity

2.10. Pyochelin estimation

2.11. Pyoverdin estimation

2.12. Protease production

2.13. Elastase production

2.14. Phopholipase C (PLC) production

2.15. Hemolysin production

2.16. Cell free hemolysin assay

2.17. Cell bound hemolysin assay

2.18. Statistical analysis

3. Results and discussion

Acknowledgements

References