Elsevier

Biochimie

Volume 66, Issue 1, January 1984, Pages 49-58
Biochimie

Studies on the structure of yeast phosphofructokinase

https://doi.org/10.1016/0300-9084(84)90191-3Get rights and content

Résumé

Une méthode efficace de purification de la phosphofructokinase de levure est présentée dans cet article. La rapidité de la procédure proposée permet d'obtenir un enzyme présentant un minimum de dégradations protéolytiques. Le poids moléculaire de l'enzyme natif d'une part, celui de ses sous-unités d'autre part, ont été évalués au moyen de plusieurs méthodes indépendantes. Cependant, la précision de chaque détermination est insuffisante pour permettre de trancher entre une structure hexamérique ou octamérique de l'enzyme. Par contre, les expériences de pontages chimiques démontrent la structure octamérique de la phosphofructokinase de levure. Ce résultat permet d'affirmer que certaines méthodes de détermination de poids moléculaires conduisent à des résultats erronés. En particulier, nos expériences indiquent que les résultats obtenus par filtration sur gel de protéines natives, doivent être considérés avec beaucoup de précautions.

Abstract

In this paper, we describe an efficient procedure for the purification of yeast phosphofructokinase. This procedure eliminates any time delay and enables to obtain an enzyme with minimum proteolytic alterations. The molecular weights of the oligomeric enzyme and of its constitutive subunits were both evaluated by means of several independent methods. However, the accuracy of each measurement was not sufficient to discriminate between an hexameric and an octameric structure of the enzyme oligomer. On the other hand, crosslinking experiments demonstrated the octameric structure of yeast phosphofructokinase. Obviously, some methods of molecular weight determination have led to erroneous results. In particular, our experiments show that the reliability of molecular weight determinations performed by gel filtration of native proteins must be considered with caution.

References (48)

  • D. Blangy

    FEBS Lett.

    (1968)
  • K.H. Ling et al.

    J. Biol. Chem.

    (1965)
  • R.P. Aaronson et al.

    J. Biol. Chem.

    (1972)
  • V. Paetkau et al.

    J. Biol. Chem.

    (1967)
  • K. Herrmann et al.

    FEBS Lett.

    (1973)
  • M.N. Tijane et al.

    FEBS Lett.

    (1982)
  • M.N. Tijane et al.

    J. Biol. Chem.

    (1980)
  • M. Laurent et al.

    Biochem. Biophys. Res. Commun.

    (1978)
  • Z. Lobo et al.

    FEBS Lett.

    (1982)
  • G. Kopperschläger et al.

    Biochem. Biophys. Res. Commun.

    (1976)
  • M.N. Tijane et al.

    FEBS Lett.

    (1979)
  • M. Laurent et al.

    J. Biol. Chem.

    (1979)
  • M. Laurent et al.

    Biochem. Biophys. Res. Commun.

    (1977)
  • M. Hill et al.

    FEBS Lett.

    (1979)
  • K.H. Ling et al.

    J. Biol. Chem.

    (1965)
  • M.L. Fishman

    Anal. Biochem.

    (1976)
  • C.J. Coffee et al.

    J. Biol. Chem.

    (1973)
  • C.L. Sia et al.

    Arch. Biochem. Biophys.

    (1968)
  • G. Kopperschläger et al.

    Anal. Biochem.

    (1982)
  • P. Welch et al.

    Anal. Biochem.

    (1981)
  • T.J. Lindell et al.

    J. Biol. Chem.

    (1968)
  • M. Le Maire et al.

    Anal. Biochem.

    (1980)
  • P.J. Hudson et al.
  • D. Kotlarz et al.

    Eur. J. Biochem.

    (1981)
  • Cited by (12)

    • The crystal structures of eukaryotic phosphofructokinases from Baker's yeast and rabbit skeletal muscle

      2011, Journal of Molecular Biology
      Citation Excerpt :

      It interacts with proteins of the cytoskeleton.10,11 By contrast, Saccharomyces cerevisiae PFK (ScPFK) forms stable heterooctamers α4β4 with a molecular mass of ∼ 800 kDa and a sedimentation coefficient 21S.12,13 Both α and β subunits are homologous to each other and show an internal sequence duplication similar to that seen in mammalian PFKs.14

    • Phosphofructokinase from baker's yeast

      1994, Methods in Enzymology
    View all citing articles on Scopus
    ∗∗

    Present address: Unité de Biochimie des Régulations Cellulaires, Département de Biochimie et Gènétique Microbienne, Institut Pasteur, 28, rue du Docteur Roux, 75724 Paris Cedex 15.

    §

    Deceased.

    View full text