Quantitative Bestimmung humaner CMV-DNA im Speichel von Patienten mit Knochenmark- und Stammzelltransplantation mithilfe der TaqMan®-PCR

Zusammenfassung

Hintergrund

Die humane Zytomegalievirusinfektion (HCMV-Infektion) kann bei immunkompromittierten Patienten, so auch nach Knochenmark- (KMT) und Stammzelltransplantation (SCT), Ursache für schwere, zum Teil lebensbedrohliche Erkrankungen sein. Das Risiko einer HCMV-Erkrankung wird vor der Transplantation durch die Bestimmung von HCMV-Antikörpern im Blut von Empfänger (E) und Spender (S) ermittelt. Virusträger sind Anti-HCMV-IgG-Antikörper-positiv. Es ergeben sich die folgenden Viruskonstellationen: Gruppe 1 (E+/S+), Gruppe 2 (E+/S−), Gruppe 3 (E−/S+) und Gruppe 4 (E−/S−).

Ziel

Ziel der Untersuchung war die qualitative und quantitative Bestimmung der HCMV-Viruslast im Speichel von Patienten mit KMT und SCT.

Patienten und Methode

Zur Bestimmung des HCMV wurde eine TaqMan®-PCR etabliert. Ruhespeichel von 20 Patienten wurde vor der KMT und SCT, während der Konditionierungsphase sowie nach der Transplantation entnommen. Die DNA wurde isoliert und mit der TaqMan®-PCR auf HCMV-DNA untersucht.

Ergebnisse

HCMV-DNA konnte bei insgesamt 7 Patienten isoliert werden. Bei allen 4 Patienten der Gruppe 1 (E+/S+) wurde HCMV-DNA nachgewiesen. Im Speichel der 7 Patienten der Gruppe 2 (E+/S−) ließ sich nur in 3 Fällen HCMV-DNA bestimmen. Bei dem einen Patienten der Gruppe 3 (E−/S+) und den acht Patienten der Gruppe 4 (E−/S−) wurde keine HCMV-DNA isoliert.

Schlussfolgerung

Die TaqMan®-PCR erbringt einen sicheren quantitativen Nachweis von HCMV-DNA im Speichel. Bei 3 Patienten, die Anti-HCMV-IgG-positiv waren und ein Anti-CMV-IgG-negatives Transplantat erhalten haben, konnte HCMV-DNA bestimmt werden, wohingegen in der Gruppe HCMV-negativer Spender und HCMV-negativer Empfänger das Virus bei keinem der Patienten nachweisbar war. Das Risiko der HCMV-Reaktivierung ist somit größer als das einer Neuinfektion.

Abstract

Background

Human cytomegalovirus (HCMV) infection is associated with severe and life-threatening diseases in immunocompromised patients, especially after bone marrow (BM) and stem cell (SC) transplantation. Prior to transplantation the potential risk of HCMV disease is therefore determined by HCMV-antibody blood testing of transplant donor (D) and recipient (R). Virus carriers are positive for anti-CMV-IgG. Virus patterns are distinguished as follows: group 1 (D+/R+), group 2 (D−/R+), group 3 (D+/R−), and group 4 (D−/R−).

Aim

The aim of this study was qualitative and quantitative determination of the HCMV DNA load in saliva of BM and SC transplantation patients.

Patients and method

Unstimulated saliva was collected from 20 patients prior to BM and SC transplantation, during the time of conditioning, and after transplantation. DNA was isolated and analyzed for evidence of HCMV DNA with TaqMan PCR.

Results

HCMV DNA was isolated in seven cases. In all group 1 patients (D+/R+) HCMV DNA could be demonstrated. Only three of seven group 2 patients (D−/R+) were positive for HCMV DNA. The only group 3 patient (D+/R−) and all eight group 4 patients (D−/R−) were negative.

Conclusion

TaqMan PCR is a reliable method for HCMV DNA quantification. In three patients (anti-HCMV-IgG positive) who received an anti-CMV-IgG negative transplant HCMV DNA was isolated. In contrast, no HCMV-DNA was evident in HCMV-negative patients who received an HCMV-negative transplant. Accordingly, the risk of HCMV reactivation is more probable than the risk of reinfection.